டைத்தியோதிரெயிட்டால் (DTT) என்பது பரவலாகப் பயன்படுத்தப்படும் ஒரு ஒடுக்கும் காரணியாகும், இது புதிய பசுமைச் சேர்க்கைப்பொருள் என்றும் அழைக்கப்படுகிறது. இது இரண்டு மெர்காப்டான் குழுக்களை (-SH) கொண்ட ஒரு சிறிய மூலக்கூறு கரிமச் சேர்மமாகும். அதன் ஒடுக்கும் பண்புகள் மற்றும் நிலைத்தன்மை காரணமாக, DTT உயிர்வேதியியல் மற்றும் மூலக்கூறு உயிரியல் சோதனைகளில் பரவலாகப் பயன்படுத்தப்படுகிறது.
புரதங்கள் மற்றும் பிற உயிர்மூலக்கூறுகளில் உள்ள டைசல்பைடு பிணைப்புகளைக் குறைப்பதே DTT-யின் முக்கியப் பணியாகும். டைசல்பைடு பிணைப்பு என்பது புரத மடிப்பு மற்றும் நிலைத்தன்மையின் ஒரு முக்கியப் பகுதியாகும். ஆனால், ஒடுக்கக்கூடிய SDS-PAGE பகுப்பாய்வு, புரத மறுசேர்க்கை மற்றும் மடிப்பு போன்ற சில சோதனைச் சூழ்நிலைகளில், புரதத்தின் இடஞ்சார்ந்த கட்டமைப்பை வெளிக்கொணர, டைசல்பைடு பிணைப்பை இரண்டு தயோல் குழுக்களாகக் குறைப்பது அவசியமாகிறது. DTT ஆனது டைசல்பைடு பிணைப்புகளுடன் வினைபுரிந்து அவற்றை மெர்காப்டான் குழுக்களாகக் குறைக்கிறது. இதன் மூலம், புரதத்தின் இடஞ்சார்ந்த கட்டமைப்பை வெளிக்கொணர்ந்து, அதனைப் பகுப்பாய்வு செய்வதையும் கையாளுவதையும் எளிதாக்குகிறது.
நொதியின் செயல்பாடு மற்றும் நிலைத்தன்மையைப் பாதுகாக்கவும் DTT பயன்படுத்தப்படலாம். சில நொதி-ஊக்க வினைகளில், ஆக்ஸிஜனேற்றியால் நொதியின் செயல்பாடு குறைக்கப்படலாம். DTT ஆனது ஆக்ஸிஜனேற்றிகளுடன் வினைபுரிந்து அவற்றை பாதிப்பில்லாத பொருட்களாகக் குறைத்து, அதன் மூலம் நொதியின் செயல்பாடு மற்றும் நிலைத்தன்மையைப் பாதுகாக்கிறது.
β-மெர்கேப்டோஎத்தனால் (β-ME) போன்ற பாரம்பரிய ஒடுக்கும் காரணிகளுடன் ஒப்பிடும்போது, DTT ஒரு பாதுகாப்பான மற்றும் அதிக நிலைத்தன்மை கொண்ட ஒடுக்கும் காரணியாகக் கருதப்படுகிறது. இது நீர்க்கரைசலில் நிலைத்தன்மையுடன் இருப்பது மட்டுமல்லாமல், உயர் வெப்பநிலை மற்றும் அமில-காரச் சூழல்களிலும் தனது ஒடுக்கும் பண்புகளைத் தக்க வைத்துக் கொள்கிறது.
DTT-யின் பயன்பாடு ஒப்பீட்டளவில் எளிமையானது. பொதுவாக, DTT ஒரு பொருத்தமான தாங்கல் கரைசலில் (buffer) கரைக்கப்பட்டு, பின்னர் சோதனை அமைப்பில் சேர்க்கப்படுகிறது. DTT-யின் உகந்த செறிவானது குறிப்பிட்ட சோதனைக்கு ஏற்ப தீர்மானிக்கப்பட வேண்டும், மேலும் இது பொதுவாக 0.1-1mM வரம்பில் பயன்படுத்தப்படுகிறது. குறைந்த செறிவுகள், செல் வளர்ச்சியில் ஏற்படும் பாதகமான விளைவுகளைக் குறைப்பதோடு, இலக்குப் புரதங்களின் மிகை வெளிப்பாட்டின் காரணமாக ஏற்படும் செல் நச்சுத்தன்மையையும் குறைக்கக்கூடும். அதிக செறிவுகள், செல்களுக்கு அதீத வளர்சிதை மாற்றச் சுமையை ஏற்படுத்தி, செல் வளர்ச்சி மற்றும் வெளிப்பாட்டுத் திறனைப் பாதிக்கக்கூடும்.
உகந்த செறிவைத் தீர்மானிப்பதற்கான வழி, வெவ்வேறு செறிவுகளில் IPTG தூண்டல் சோதனைகளை நடத்துவதன் மூலம் இலக்குப் புரதத்தின் வெளிப்பாட்டு அளவை மதிப்பிடுவதாகும். பல்வேறு IPTG செறிவுகளைப் (எ.கா. 0.1 mM, 0.5 mM, 1 mM, போன்றவை) பயன்படுத்தி சிறிய அளவிலான வளர்ப்புச் சோதனைகளைச் செய்யலாம். மேலும், இலக்குப் புரதத்தின் வெளிப்பாட்டு அளவைக் கண்டறிவதன் மூலம் (எ.கா. வெஸ்டர்ன் பிளாட் அல்லது ஒளிர்தல் கண்டறிதல்) வெவ்வேறு செறிவுகளில் ஏற்படும் வெளிப்பாட்டு விளைவை மதிப்பிடலாம். சோதனை முடிவுகளின்படி, சிறந்த வெளிப்பாட்டு விளைவைக் கொண்ட செறிவு, உகந்த செறிவாகத் தேர்ந்தெடுக்கப்பட்டது.
மேலும், ஒத்த சோதனை நிலைமைகளின் கீழ் பொதுவாகப் பயன்படுத்தப்படும் IPTG செறிவின் வரம்பைப் புரிந்துகொள்வதற்கும், பின்னர் சோதனைத் தேவைகளுக்கு ஏற்ப அதை மேம்படுத்தி சரிசெய்வதற்கும், நீங்கள் தொடர்புடைய ஆய்வுக் கட்டுரைகளையோ அல்லது பிற ஆய்வகங்களின் அனுபவங்களையோ பார்க்கலாம்.
வெவ்வேறு வெளிப்பாட்டு அமைப்புகள், இலக்குப் புரதங்கள் மற்றும் சோதனை நிலைமைகளைப் பொறுத்து உகந்த செறிவு மாறுபடலாம் என்பதைக் கவனத்தில் கொள்ள வேண்டியது அவசியம், எனவே ஒவ்வொரு நேர்வுக்கும் ஏற்ப உகந்ததாக்குவதே சிறந்தது.
சுருக்கமாக, DTT என்பது புரதங்கள் மற்றும் பிற உயிர்மூலக்கூறுகளில் உள்ள டைசல்பைட் பிணைப்புகளை ஒடுக்கவும், நொதியின் செயல்பாடு மற்றும் நிலைத்தன்மையைப் பாதுகாக்கவும் பயன்படும், பரவலாகப் பயன்படுத்தப்படும் ஒரு ஒடுக்கும் காரணியாகும். இது உயிர்வேதியியல் மற்றும் மூலக்கூறு உயிரியல் சோதனைகளில் பரவலாகப் பயன்படுத்தப்பட்டு வருகிறது.
பதிவிட்ட நேரம்: செப்-28-2023