Dithiothreitol (DTT) என்பது பொதுவாகப் பயன்படுத்தப்படும் குறைக்கும் முகவர், இது புதிய பச்சை சேர்க்கை என்றும் அழைக்கப்படுகிறது.இது இரண்டு mercaptan குழுக்கள் (-SH) கொண்ட ஒரு சிறிய மூலக்கூறு கரிம கலவை ஆகும்.அதன் குறைக்கும் பண்புகள் மற்றும் நிலைத்தன்மை காரணமாக, டிடிடி உயிர் வேதியியல் மற்றும் மூலக்கூறு உயிரியல் சோதனைகளில் பரவலாகப் பயன்படுத்தப்படுகிறது.
டிடிடியின் முக்கிய பங்கு புரதங்கள் மற்றும் பிற உயிர் மூலக்கூறுகளில் உள்ள டிசல்பைட் பிணைப்புகளைக் குறைப்பதாகும்.டிஸல்பைட் பிணைப்பு புரத மடிப்பு மற்றும் நிலைத்தன்மையின் ஒரு முக்கிய பகுதியாகும், ஆனால் குறைக்கக்கூடிய SDS-PAGE பகுப்பாய்வு, புரத மறுசீரமைப்பு மற்றும் மடிப்பு போன்ற சில சோதனை நிலைமைகளின் கீழ், இடஞ்சார்ந்த கட்டமைப்பை அவிழ்க்க இரண்டு தியோல் குழுக்களாக டிஸல்பைட் பிணைப்பைக் குறைக்க வேண்டியது அவசியம். புரதம்.டிடிடி டிஸல்பைட் பிணைப்புகளுடன் வினைபுரிந்து அவற்றை மெர்காப்டன் குழுக்களாகக் குறைக்கலாம், இதனால் புரதத்தின் இடஞ்சார்ந்த கட்டமைப்பைத் திறந்து பகுப்பாய்வு செய்வதையும் கையாளுவதையும் எளிதாக்குகிறது.
டிடிடி என்சைம் செயல்பாடு மற்றும் நிலைத்தன்மையைப் பாதுகாக்கவும் பயன்படுத்தப்படலாம்.சில நொதி-வினையூக்கிய எதிர்வினைகளில், நொதியின் செயல்பாடு ஆக்ஸிஜனேற்றத்தால் குறைக்கப்படலாம்.டிடிடி ஆக்சிடன்ட்களுடன் வினைபுரிந்து அவற்றை பாதிப்பில்லாத பொருட்களாகக் குறைக்கலாம், இதனால் நொதியின் செயல்பாடு மற்றும் நிலைத்தன்மையைப் பாதுகாக்கிறது.
β-mercaptoethanol (β-ME) போன்ற பாரம்பரிய குறைக்கும் முகவர்களுடன் ஒப்பிடும்போது, DTT ஒரு பாதுகாப்பான மற்றும் நிலையான குறைக்கும் முகவராகக் கருதப்படுகிறது.இது அக்வஸ் கரைசலில் நிலையானது மட்டுமல்ல, அதிக வெப்பநிலை மற்றும் அமில-அடிப்படை நிலைகளின் கீழ் அதன் குறைக்கும் பண்புகளையும் பராமரிக்கிறது.
டிடிடியின் பயன்பாடு ஒப்பீட்டளவில் எளிமையானது.பொதுவாக, டிடிடி பொருத்தமான இடையகத்தில் கரைந்து, பின்னர் சோதனை முறையில் சேர்க்கப்படுகிறது.டிடிடியின் உகந்த செறிவு குறிப்பிட்ட பரிசோதனையின்படி தீர்மானிக்கப்பட வேண்டும், மேலும் இது பொதுவாக 0.1-1எம்எம் வரம்பில் பயன்படுத்தப்படுகிறது.குறைந்த செறிவுகள் செல் வளர்ச்சியில் பாதகமான விளைவுகளை குறைக்கலாம் மற்றும் இலக்கு புரதங்களின் அதிகப்படியான வெளிப்பாடு காரணமாக சைட்டோடாக்சிசிட்டியை குறைக்கலாம்.அதிக செறிவுகள் அதிகப்படியான செல் வளர்சிதை மாற்ற சுமையை ஏற்படுத்தலாம், இது உயிரணு வளர்ச்சி மற்றும் வெளிப்பாடு செயல்திறனை பாதிக்கலாம்.
வெவ்வேறு செறிவுகளில் IPTG தூண்டல் சோதனைகளை நடத்துவதன் மூலம் இலக்கு புரதத்தின் வெளிப்பாடு அளவை மதிப்பிடுவதே உகந்த செறிவைத் தீர்மானிப்பதற்கான வழி.IPTG செறிவுகளின் வரம்பைப் பயன்படுத்தி சிறிய அளவிலான கலாச்சார சோதனைகள் செய்யப்படலாம் (எ.கா. 0.1 mM, 0.5 mM, 1 mM, முதலியன) மற்றும் இலக்கு புரதத்தின் வெளிப்பாடு அளவைக் கண்டறிவதன் மூலம் வெவ்வேறு செறிவுகளில் வெளிப்பாடு விளைவை மதிப்பீடு செய்யலாம் (எ.கா. மேற்கத்திய ப்ளாட் அல்லது ஃப்ளோரசன்ஸ் கண்டறிதல்).சோதனை முடிவுகளின்படி, சிறந்த வெளிப்பாடு விளைவு கொண்ட செறிவு உகந்த செறிவாக தேர்ந்தெடுக்கப்பட்டது.
கூடுதலாக, இதேபோன்ற சோதனை நிலைமைகளின் கீழ் பொதுவாகப் பயன்படுத்தப்படும் IPTG செறிவு வரம்பைப் புரிந்துகொள்வதற்கு தொடர்புடைய இலக்கியங்கள் அல்லது பிற ஆய்வகங்களின் அனுபவத்தைப் பார்க்கவும், பின்னர் சோதனைத் தேவைகளுக்கு ஏற்ப மேம்படுத்தவும் சரிசெய்யவும்.
வெவ்வேறு வெளிப்பாடு அமைப்புகள், இலக்கு புரதங்கள் மற்றும் சோதனை நிலைமைகளைப் பொறுத்து உகந்த செறிவு மாறுபடலாம் என்பதைக் கவனத்தில் கொள்ள வேண்டியது அவசியம், எனவே ஒவ்வொரு வழக்கின் அடிப்படையில் மேம்படுத்துவது சிறந்தது.
சுருக்கமாக, டிடிடி என்பது பொதுவாகப் பயன்படுத்தப்படும் குறைக்கும் முகவர் ஆகும், இது புரதங்கள் மற்றும் பிற உயிர் மூலக்கூறுகளில் உள்ள டிஸல்பைட் பிணைப்புகளைக் குறைக்கவும், நொதி செயல்பாடு மற்றும் நிலைத்தன்மையைப் பாதுகாக்கவும் பயன்படுகிறது.இது உயிர்வேதியியல் மற்றும் மூலக்கூறு உயிரியல் சோதனைகளில் பரவலாகப் பயன்படுத்தப்படுகிறது.
இடுகை நேரம்: செப்-28-2023