உகந்த செறிவை எவ்வாறு தீர்மானிப்பது?
தூண்டியான IPTGக்கு (isopropyl-beta-d-thiogalactoside), அதிக செறிவு, சிறந்தது.உகந்த செறிவு குறிப்பிட்ட சோதனை நிலைமைகள் மற்றும் விரும்பிய தூண்டல் விளைவைப் பொறுத்தது.
பொதுவாக, IPTG இன் செறிவு 0.1-1 mM வரம்பில் பயன்படுத்தப்படுகிறது.குறைந்த செறிவுகள் செல் வளர்ச்சியில் பாதகமான விளைவுகளை குறைக்கலாம் மற்றும் இலக்கு புரதங்களின் அதிகப்படியான வெளிப்பாடு காரணமாக சைட்டோடாக்சிசிட்டியை குறைக்கலாம்.அதிக செறிவுகள் அதிகப்படியான செல் வளர்சிதை மாற்ற சுமையை ஏற்படுத்தலாம், இது உயிரணு வளர்ச்சி மற்றும் வெளிப்பாடு செயல்திறனை பாதிக்கலாம்.
வெவ்வேறு செறிவுகளில் IPTG தூண்டல் சோதனைகளை நடத்துவதன் மூலம் இலக்கு புரதத்தின் வெளிப்பாடு அளவை மதிப்பிடுவதே உகந்த செறிவைத் தீர்மானிப்பதற்கான வழி.IPTG செறிவுகளின் வரம்பைப் பயன்படுத்தி சிறிய அளவிலான கலாச்சார சோதனைகள் செய்யப்படலாம் (எ.கா. 0.1 mM, 0.5 mM, 1 mM, முதலியன) மற்றும் இலக்கு புரதத்தின் வெளிப்பாடு அளவைக் கண்டறிவதன் மூலம் வெவ்வேறு செறிவுகளில் வெளிப்பாடு விளைவை மதிப்பீடு செய்யலாம் (எ.கா. மேற்கத்திய ப்ளாட் அல்லது ஃப்ளோரசன்ஸ் கண்டறிதல்).சோதனை முடிவுகளின்படி, சிறந்த வெளிப்பாடு விளைவு கொண்ட செறிவு உகந்த செறிவாக தேர்ந்தெடுக்கப்பட்டது.
கூடுதலாக, இதேபோன்ற சோதனை நிலைமைகளின் கீழ் பொதுவாகப் பயன்படுத்தப்படும் IPTG செறிவு வரம்பைப் புரிந்துகொள்வதற்கு தொடர்புடைய இலக்கியங்கள் அல்லது பிற ஆய்வகங்களின் அனுபவத்தைப் பார்க்கவும், பின்னர் சோதனைத் தேவைகளுக்கு ஏற்ப மேம்படுத்தவும் சரிசெய்யவும்.
வெவ்வேறு வெளிப்பாடு அமைப்புகள், இலக்கு புரதங்கள் மற்றும் சோதனை நிலைமைகளைப் பொறுத்து உகந்த செறிவு மாறுபடலாம் என்பதைக் கவனத்தில் கொள்ள வேண்டியது அவசியம், எனவே ஒவ்வொரு வழக்கின் அடிப்படையில் மேம்படுத்துவது சிறந்தது.
இடுகை நேரம்: செப்-28-2023